
一、培養基配方
配方:玉米粉1%、葡萄糖2%、蛋白胨1%、酵母粉0.5%、磷酸二氫鉀0.1%、水95.35%、硫酸鎂0.05%、維生素B1 10mg、PH值調至6.5左右。
二、制作培養方法
1. 制作一級搖瓶種:將這些原料溶于水后裝在500毫升三角瓶中,每個三角瓶裝量200毫升,放入玻璃珠3粒左右,塞緊棉塞,然后用4層紗布罩住棉塞、瓶口扎緊,放在高壓滅菌鍋內進行消毒,待壓力表上升至0.5kg/cm2壓力時,即放凈冷氣待指針降至0后,再關掉放氣閥門,待溫度表指針逐漸上升至1.1kg/cm2后就開始保溫30分鐘后,慢慢下降指針至0,然后開蓋冷卻至常溫,再移入接種箱或超凈工作臺等待接種。
2. 接種方法:先把滅菌后的北蟲草液體菌種培養基移放在超凈工作臺上,并把北蟲草母種和接種勾、酒精燈、酒精棉球等接種物品也放在超凈工作臺上,工作服掛在接種室消毒。然后在接種室點燃煙霧劑(用臭氧消毒器更好),立即關閉所有門窗密閉消毒同時打開紫外線燈。待40min后,將煙霧放凈,關閉紫外線燈,接種人員就可進行接種。接種的方法是穿好工作服,打開超凈工作臺風機,點燃酒精燈,左手拿著母種試管對準火焰口,右手拿著鐵勾在酒精燈火焰消毒3-5秒種后立即伸進母種試管內把菌種分成5-7段,再用左手迅速將紗布瓶蓋打開,右手立即把一段菌塊勾入瓶內(每瓶接入5-6片0.5平方厘米大小菌種)速將瓶蓋按原樣蓋緊。
當北蟲草菌種接好后,移入22-24℃恒溫培養室,搖床震蕩發菌培養。搖床轉速140r/min,經過4-6天的發菌培養,經檢查北蟲草菌液的顏色開始清亮、菌球密集,瓶口聞有很濃的北蟲草氣味,可判斷為菌種優良。如發現發菌瓶內濃度低、氣味臭,并有五顏六色的菌液,就是有雜菌污染,堅決不能用。
3. 制作二級搖瓶:培養基同一級,用5000ml三角瓶裝量2000ml北蟲草液體菌種,滅菌冷卻后把一級搖瓶種按10%無菌操作接入大搖瓶,22-24℃,140r/min震蕩培養72小時后,菌球大小均勻、密度80%以上,菌液清亮,氣味清香、無污染的即為合格菌種。由于5000ml大搖瓶體積較大,用手提高壓鍋放不下,用大鍋又太浪費,為解決大搖瓶滅菌問題,花山食用菌研究所研制了一款100升立式電加熱自控高壓滅菌鍋,一次可滅4個5000的大搖瓶,同時,研制了一次可搖5-7瓶5000ml大三角瓶的搖床,輕便、無噪音、耗能低。
4. 菌種稀釋:發好的蟲草液體菌種接種前需要稀釋以擴大接種規模。稀釋倍數依據接種的盤數按5-8倍稀釋。用稀釋罐稀釋時,按液體罐空消、實消操作規程:
(A)發酵罐空消
發酵罐空消(內膽、過濾器、管線的消毒)是對發酵罐進行設備消毒滅菌的過程,對于放置一周不用的發酵罐或者是因為停電使空壓機(打氣泵)停止運轉的發酵罐都需要進行發酵罐的空消操作,具體的操作方法:
(1)關閉發酵罐,除夾套排氣門外的所有閥門,擰緊發酵罐罐口蓋子。 (2)啟動電源,打開控制柜“滅菌”鍵,此時進入滅菌狀態。
(3)當溫度升到100℃夾套有蒸汽冒出時關閉夾套排氣閥門,此時給夾套升溫升壓,當夾套壓力達到0.05Mpa以上時,緩慢打開夾套進過濾器閥門,打開過濾器尾閥門。
(4)當過濾器冷凝水排放完畢有蒸汽冒出后微開過濾器尾閥門,緩慢打開進氣閥門尾閥門,排放空氣管道內的冷凝水,冷凝水排放完畢后緩慢打開進氣閥門,使得蒸汽慢慢進入罐體。
(5)微開發酵罐排氣氣閥門,緩慢將發酵罐內的冷空氣排放出去,在空消的整個過程中,控制發酵罐排氣閥門,使得發酵罐排氣閥門有少量蒸汽流通。
(6)當控制柜溫度顯示接近123℃,發酵罐罐內壓力接近0.12Mpa時緩慢打開接種管道尾端,將接種管道內冷凝水排放完畢后,保證尾端有少量蒸汽冒出保證蒸汽流通。
(7)當溫度達到123℃,發酵罐壓力達到0.12Mpa時控制柜開始時間倒計時,屏幕上顯示溫度和倒計時時間,當倒計時時間為0時,控制柜自動報警,此時空消結束。
(8)空消結束后,關閉發酵罐加熱棒,關閉夾套進過濾器閥門、發酵罐進氣閥門、發酵罐接種閥門、接種管道尾端閥門。微開發酵罐排氣閥門、夾套排氣閥門、發酵罐進氣閥門尾閥門、使得夾套和發酵罐的壓力慢慢下降,當過濾器壓力即將卸完時,打開空壓機(打氣泵),使得空氣流通過濾器,通過過濾器的空氣在發酵罐進氣閥門尾閥門排放掉,流過過濾器的空氣對濾芯吹30min,使得吹出的空氣無水分后備用。
(B)發酵罐實消
(1)定量加入清水后,打開夾套排氣閥門和發酵罐排氣閥門,啟動電源,按下“滅菌”鍵,此時進入滅菌狀態。
(2)當溫度升到100℃夾套有蒸汽冒出時關閉夾套排氣閥門,發酵罐排氣閥門微開,整個發酵罐實消過程中控制發酵罐排氣閥門的開度,保證發酵罐罐內冷空氣排凈并保證有蒸汽流通。
(3)當控制柜顯示屏幕上顯示溫度123℃,壓力表壓力0.12 Mpa時控制柜自動倒計時,屏幕上可顯示發酵罐溫度和倒計時時間,當時間倒計時為0時,控制柜自動報警,打開夾套排氣閥門,發酵罐排氣閥門,使得夾套和發酵罐壓力緩慢下降(發酵罐壓力不能掉零)此時發酵罐滅菌結束。
注意:計時開始時和滅菌即將結束時需要對發酵罐進行排水操作,微開接種閥門,有少量氣、水排出即可,每次排水時間3-5min。排水的目的一是排出閥門處的生水;二是對閥門管路進行滅菌。
定量加入清水123℃滅菌40分鐘,冷卻至20度,使用空壓機保持正壓,無菌操作方法倒入搖瓶種,無菌空氣攪拌均勻,罐內升壓至0.5mpa接種(接種與液體接種操作相同),接種量50-60ml。接種后18-21℃避光培養,好的菌種7-10天封滿料面。
(4)相關設備:為實現北蟲草的工廠化周年生產,食用菌研究所研制了整套工廠化生產工藝流程及配套設備,擇其主要簡要介紹:
①紅外線定位定量自動裝盤機,自動定量加料加水傳送,節約人工、效率高;
②5-50立方高壓滅菌柜,煤、電、柴,自燒等各種型號;
③100級無菌凈化接種線,保障了接種高成功率;
④不銹鋼電加熱自控液體菌種發酵罐,既可作稀釋罐也可發酵培養。


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